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TESIS DE PREGRADO ALUMNOS DE 5º AÑO TECNOLOGÍA MÉDICA

2017: Asociación de p16 y HPV en biopsias malignas y benignas del canal anal.

Aracelly Quiroz, Joel Herrera. TM. Morfo Fisiopatología y Citodiagnóstico

Trabajo ganador del 1er lugar en "Exposicion Oral Morfofisiopatología y Citodiagnóstico" en VIII Congreso Cientifico de Estudiantes de Tecnología Médica. 

 

Resumen 

Introducción: El cáncer anal, aunque es un cáncer relativamente raro, ha ido en un aumento constante en los últimos años su agente etiológico es el Virus del Papiloma Humano (HPV) de alto riesgo (AR) oncogénico el cual es conocido por su patogenia en el cáncer cervical.

Marco Teórico: El HPV AR tienes la capacidad de integrarse en el genoma del huésped produciendo la oncogénesis viral que lleva a la Neoplasia Intraepitelial (NIA) y luego al cáncer. No así los HPV Bajo riesgo (BR). Los métodos diagnósticos de la patología está la biopsia en donde se puede usar Inmunohistoquímica (IHQ) de p16/Ki-67, marcadores de descontrol del ciclo celular. Objetivo: Determinar la asociación del HPV y la expresión de p16 en lesiones neoplásicas benignas y malignas del canal anal en biopsias de archivo.

Materiales y Métodos: A las 40 biopsias totales de Cáncer, NIA, Condilomas y Lesiones Benigna del canal anal se le realizará PCR hacia L1, E6/E7, específico HPV16-18. Además de IHQ p16INK4a.

Resultados: 23/40 fueron positivas al HPV. De estas 11/23 fueron de AR, 7/23 BR y 5/23 AR/BR. Se encontró 63% correspondían a HPV16. Para la IHQ P16 INK4a 14/26 mostraron patrón difuso siendo todas cáncer y NIA, 3/26 un patrón focal y el resto negativas correspondiendo a condilomas.

Discusión: Esto concuerda con lo que concluyen los autores, en donde la tinción de p16 difusa es el indicador más fiable de la presencia de HPV-AR y neoplasias de alto grado. Mientras que un patrón focal es asociado a lesiones de bajo grado como condilomas.

Conclusión: Existe asociación entre p16 y HPV, p16 puede usarse como marcador sustituto de la oncogénesis viral.

2014: Revisión de la importancia de Vibrio parahaemolyticus

Nelson Contreras, Seigi Figueroa y Valentina Jorquera. TM. Bio-análisis Clínico, Hematología y Banco de Sangre

Resumen

Introducción. Vibrio parahaemolyticus es el principal agente bacteriano de gastroenteritis aguda en áreas con alto consumo de productos marinos. Su infección se asociaba con diversos serotipos, sin embargo, el 1996 se reporta un único serotipo (O3:K6) con marcadores genéticos específicos (tdh, toxRS/New y/o orf/8) que ocasionó una pandemia iniciada en la India y que se expandió hasta América, en Perú (1996), Chile (1998), EE.UU. (1998), Brasil (2001) y México (2004) (Velázquez-Roman J., 2014).

El Vibrio parahaemolyticus, familia Vibrionaceae, género Vibrio presenta 66 especies, de las cuales 12 son patógenas para el hombre, siendo los de mayor importancia el Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus y el Vibrio vulnificus. La primera especie del género se aisló en 1854, el agente causal del cólera, Vibrio cholerae, por el médico italiano Filippo Pacini quien estudiaba los brotes de esta enfermedad en Florencia.

El año 1953 investigadores japoneses identificaron por primera vez al Vibrio parahaemolyticus. Es un bacilo Gram negativo, diámetro entre 0,5 a 0,8 um y largo de 1,4 a 2,4 um, en forma de coma o rectas, con un único flagelo polar y la capacidad de formar agregados espirales o en forma de S. Habita en ambientes marinos, salobres y estuarios, alcanzando su máximo desarrollo a las 22°C. La transmisión a humanos es por consumo de moluscos bivalvos crudos. Este bacilo habita aguas templadas y se alimentan de fitoplancton a través de dos agallas; filtran grandes volúmenes de agua por acción de cilios y concentran las bacterias hasta 100 veces en sus glándulas digestivas.

Este patógeno codifica en su genoma dos importantes factores de virulencia, la hemolisina directa termoestable (TDH) y la hemolisina directa termoestable relacionada (TRH). Ambas se pueden encontrar simultáneamente o por separado, correlacionándose fuertemente con la capacidad patogénica de las cepas portadoras. En Chile el V. parahaemolyticus es considerado un patógeno emergente que ha presentado importantes brotes de diarrea a lo largo del país y principalmente en la población de la Región del Maule, que es la más afectada porque registra los índices de casos más elevados. Los primeros registros de la bacteria se reportan entre los años 1992 y 1997, donde el ISP recibió 30 muestras para confirmar el diagnóstico de intoxicación por V. parahaemolyticus. Sin embargo, el brote ocurrido en la ciudad de Antofagasta entre noviembre de 1997 a marzo de 1998 causó que este número aumentara a más de 300 muestras. Un segundo brote afectó aproximadamente a 1500 personas durante enero a marzo del 2004, principalmente en la zona de Puerto Montt, seguido de un tercero ocurrido en el 2005 en la X Región extendiéndose hasta la V Región. Finalmente el último aumento de cifras ocurrió en el 2008 y desde entonces no han ocurrido brotes importantes.

2011: Comparación entre Diagnóstico Molecular y Convencional para el Diagnóstico de MTB en biopsias de archivo del HRGGB.

Alumnos: Lissette Carvajal, Nicole Fonseca, Cristian Reyes. TM. Morfo Fisiopatología y Citodiagnóstico

Resumen

Introducción. La tuberculosis es una enfermedad crónica contagiosa causada por el Mycobacterium tuberculosis. El hombre es su reservorio natural, causando síntomas años después de la primo-infección. La enfermedad afecta a los pulmones y otros órganos, se transmite de persona a persona por vía respiratoria y la lesión histopatológica que lo caracteriza es el granuloma con necrosis caseosa central. Actualmente, para el diagnóstico se utilizan la baciloscopía, el cultivo bacteriano (gold estándar) y las técnicas histopatológicas, pero estos métodos poseen limitaciones como baja sensibilidad o exceso en tiempo de espera para conocer resultados. Por esto, se han implementado técnicas moleculares como PCR, aumentando su sensibilidad, incluso, en biopsias de archivo, pudiendo realizar la extracción de DNA de dichos tejidos y utilizarlos para manifestar la presencia de TBC. El objetivo de esta investigación fue comparar la sensibilidad entre dos métodos empleados en el diagnóstico de tuberculosis, el molecular (Nested-PCR) y el histopatológico (tinción de Ziehl-Neelsen y Auramina) en tejido fijado en formalina e incluido en parafina.

Material y Métodos. Se utilizaron 60 muestras de archivo con sospecha de tuberculosis a las que se le habían realizado las tinciones ya mencionadas, se hicieron cortes de los bloques, se realizó extracción de DNA, se confirmó la calidad del DNA extraído mediante prueba de B-globina y, finalmente, se aplicó Nested-PCR para la detección de M. tuberculosis.

Resultados. Un 54% de las muestras fueron positivas para PCR en comparación a un 18% de las tinciones histoquímicas, y la sensibilidad fue indiscutiblemente mayor para PCR (70%).

Conclusión. Estos resultados demostraron que la técnica molecular es una herramienta diagnóstica más sensible que las tinciones histoquímicas para el diagnóstico de tuberculosis en biopsias de archivo.

2008: Programa de Epidemiología, Control y Erradicación de la tuberculosis en la Región de Biobío. Diagnóstico convencional y molecular.

Alumnos: Enrique Blanco, Juan Pablo Sandoval. TM. Morfo-Fisiopatología Citodiagnóstico

Resumen

Introducción. La tuberculosis (TBC) es una enfermedad infecciosa-contagiosa bacteriana, ocasionada mayoritariamente por el Mycobacterium tuberculosis. El humano funciona como reservorio natural, estando presente tanto en portadores sanos como enfermos. Existe relación estrecha entre depresiones inmunológicas, diferentes causas, y la recurrencia de la enfermedad, llegando a ser íntima entre co-infección con VIH/SIDA. Transmisión. La tuberculosis se transmite mediante gotitas de saliva al estornudar o por deglución de la bacteria y puede afectar a cualquier órgano, pero su blanco principal es el pulmón. La lesión característica es el granuloma tuberculosos

Epidemiología. La TBC ocasiona 2 millones de muertes al año, siendo importante en regiones de Asia Sudoriental y África sub-Sahara. La situación en Sudamérica es desigual, viéndose diversas tasas entre los países. Perú y Bolivia presentan altas tasas de incidencia, mientras Chile, Uruguay y Cuba las más bajas. Estas disminuciones se dan por la adopción de políticas públicas efectivas y tratamiento eficaz.

Diagnóstico. La pesquisa de la enfermedad se realiza por baciloscopía directa con tinción de Ziehl-Neelsen, y el diagnóstico definitivo lo otorga el cultivo en medio Löwestein-Jensen. El principal problema en el diagnóstico de TBC es la demora en entregar resultados, ya que, los hallazgos radiológicos y baciloscopías, no siempre son certeros.

PCR. En la actualidad existen medios más efectivos y no requieren tanto tiempo, sin embargo, se sigue considerando el cultivo como el método de referencia. La técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction) posee una sensibilidad cercana al 80% y una especificidad casi del 100% considerándose una alternativa viable como método diagnóstico, principalmente por su rapidez y eficiencia.

2007: Banco de Tumores para la Oncopatología Molecular

Alumnas: Carla Alarcón, Mabel Pinilla, TM. Morfo- Fisiopatología y Citodiagnóstico.

Resumen

Introducción: Un banco de tumores es una colección ordenada de muestras tisulares y citológicas, cooperando con la patología molecular avanzando en el diagnóstico de neoplasias mediante técnicas que identifican marcadores moleculares terapéuticos y de pronóstico. El desarrollo de un banco de tumores en el Departamento de Anatomía Patológica en la Facultad de Medicina de la Universidad De Concepción, otorgará una herramienta esencial para el avance del diagnóstico clínico molecular en la especialidad de Oncopatología Molecular.

Materiales y Métodos: Se colectarán muestras para almacenaje en banco de tumores a partir de 15 casos de pacientes intervenidos quirúrgicamente. Todas las muestras correspondían a pacientes del Hospital Regional Guillermo Grant Benavente de Concepción, intervenidos quirúrgicamente, con toma de muestra para biopsia en la sección de Patología Quirúrgica. De acuerdo a normativas internacionales se elaboran los siguientes protocolos: de captación, de procesamiento y almacenamiento tisular, y de control de calidad. El control de calidad de las muestras de ADN colectadas fue realizado mediante PCR de secuencias de Beta-globina para determinación de la amplificabilidad del ADN y determinación de pureza y concentración mediante análisis espectrofotométrico OD 260 y OD 280.

Resultados: Se colectaron 15 muestras, 7 biopsias quirúrgicas por neoplasia y 8 a biopsias extraídas con diagnóstico de patología benigna. El control de calidad revelo que todas las muestras tenían ADN amplificable y de concentración y pureza adecuadas.

Discusión y Conclusión: Un Banco de Tumores como toda unidad operativa tiene requisitos de funcionamiento; teniendo ciertas etapas críticas de las cuales depende el resultado de este. La importancia de establecer nuevos Bancos de Tumores a nivel nacional dará pie a formación de una red oncológica a lo largo del país, permitiendo así la diversidad e intercambio de información clínica, epidemiológica, molecular y genético, entre otros. 

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